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本试剂盒采用骨架蛋白染色法染色细胞骨架，可以用于各种植物、动物的细胞骨架染色。需要荧光染色试剂盒，可以选择细胞骨架荧光染色试剂盒(货号：HR9085)。

细胞骨架是真核细胞中由蛋白质聚合而成的三维的纤维状网架体系。细胞骨架包括微丝、微管和中间纤维。细胞骨架在维持细胞形态，承受外力、保持细胞内部结构的有序性方面起重要作用。

显示细胞骨架的常用方法有两种：骨架蛋白染色法和免疫荧光染色法。骨架蛋白染色法具有简单易行的特点，但不能区分骨架蛋白的组成，有些类型的纤维太细，在光学显微镜下无法分辨，常用于骨架形态及完整性研究；免疫荧光染色法可特异显示骨架蛋白，是用一种微丝解聚抑制剂，它与肌动蛋白纤丝有强亲和作用，使肌动蛋白纤丝稳定，抑制解聚，且只与F-actin结合。因此，利用荧光标记可以清晰显示细胞中微丝的形态，利用荧光显微镜对荧光标记的细胞骨架进行观察，可以得到清晰的实验结果.具有更普遍的应用意义。

• 仪器准备：显微镜、移液器、冰箱、冰盒。
  
• 试剂准备：4%多聚甲醛或3%戊二醛、纯水、1×PBS缓冲液(pH7.4,10mM)。
       1×PBS缓冲液：8mM Na₂HPO4、2mM KH₂PO4、137mM NaCl和3mM KCl。
• 耗材准备：玻片、滴管、一次性手套。

• 标本应新鲜，且未受其他化学物品污染。
  
• 应根据组织、细胞类型不同调整通透时间。
  
• 动物细胞样本细胞通透剂处理的时间很关键，如果处理时间太短，会造成很深的背景颜色，干扰细胞骨架的观察；如果处理时间太长，会破坏骨架蛋白使骨架纤维断裂，造成细胞空洞。通透时间应控制在10～35分钟。需要根据预实验的染色结果确定最佳通透时间。一般预实验起始通透时间植物样本为20分钟，动物细胞样本15分钟。
  
• 染色液染色时间根据预实验结果可以进行调整，颜色过浅可延长染色时间，颜色过深可缩短染色时间。
  
• 洗片时动作要轻柔，避免将细胞从玻片上洗掉。
  
• 染色后用水充分洗涤，自然晾干即可，不能用常规的酒精梯度脱水方法。

• 细胞洗涤液配制：根据样本数量，将细胞洗涤液用纯水10倍稀释备用。
  
• 将制作好的细胞爬片/细胞涂片用1×细胞洗涤液洗涤一次。
  
• 细胞固定：滴加2%多聚甲醛固定细胞3秒钟，立即用细胞洗涤液洗涤3次。
  
  • 操作时滴加2%多聚甲醛固定3秒左右即可，不要超过5秒钟。吸掉多聚甲醛然后用洗涤液洗涤。样本多时可用容器装好洗涤液分别浸泡洗涤3次，样本较少时也可以加500μL洗涤液到玻片上进行洗涤。此步骤为动物细胞样本的步骤，植物切片类不需要做此步骤，第2步洗涤完直接进行第4步通透即可。
• 透化：滴加通透剂覆盖样本，处理10～30分钟。
  
• 用细胞洗涤液洗细胞3次，自然晾干。
  
• 固定：用4%多聚甲醛或3%戊二醛固定5～20分钟。
  
• 用PBS洗细胞3次，自然晾干。
  
• 染色：用细胞骨架染色液染色15分钟～1小时。
  
• 用纯水洗细胞2次，自然晾干。
  
• 用光学显微镜观察。或二甲苯透明、封片后观察。